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技術文章

MS培養基配制標準操作步驟

點擊次數:10791 發布時間:2013/7/26 8:47:33

 實驗步驟

1  MS培養基母液的母液的配制
       由于組培的植物不同,需要配制不同的培養基,為減少工件量,可把藥品配成濃縮液。有些微量元素和有機成分成分濃度極低,因此,先配制成母液的母液。建議濃度如下表: 
 
藥品名稱
配制的終濃度
配制50ml的總質量(g)
煙酸
0.01g/ml
0.5
VB6
0.1g/ml
5
甘氨酸
0.2g/ml
10
NaMoO4.2H2O
0.05g/ml
2.5
CuSO4.5H2O
0.05g/ml
2.5
KI
0.1g/ml
5
H3BO3
0.062g/ml
3.1
MnSO4. H2O
0.169g/ml
8.45
ZnSO4. 7H2O
0.172g/ml
8.6
CoCl.6H2O
0.05g/ml
2.5
VB1
0.1g/ml
5
 
  母液的母液的配制過程:
 
(1)根據表中的濃度,稱取50ml體積的藥品的質量。
(2)加入到相應的溶液中,定容至50ml。
(3) 放入密封50ml塑膠管中,-20℃保存。

2  MS培養基母液濃度表:
(1)MS-A(macro):為工作液濃度的50倍
 
NH4NO3
41.25g/500ml
 KNO3
47.5g/500ml
MgSO4·7H2O
9.25g/500ml
KH2PO4
9.25g/500ml
        (2)MS-B(micro):為工作液濃度的100倍
     
H3BO3
0.124g/200ml
MnSO4·4H2O
0.338g/200ml
ZnSO4·7H2O
0.172g/200ml
CuSO4·5H2O
0.0005g/200ml
CoCl2·6H2O
0.0005g/200ml
KI
0.0166g/200ml
Na2MoO4·2H2O
0.005g/200ml
        (3) MS-C:為工作液濃度的100倍
CaCl2·2H2O
22.0g/500ml
        (4) MS-D:為工作液濃度的100倍
煙酸
0.01g/200ml
VB6
0.01g/200ml
VB1
0.002g/200ml
甘氨酸
0.04g/200ml
 
  (5)MS-E:為工作液濃度的100倍
Na2-EDTA
3.725g/500m
FeSO4·7H2O
2.875g/500m
 
 3  母液的配制
    MS-A:稱取NH4NO3  41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
    MS-B:吸取母液的母液如下,蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。

 
母液的母液量
母液終濃度
H3BO3
 
0.124g/200ml
MnSO4·4H2O
 
0.338g/200ml
ZnSO4·7H2O
 
0.172g/200ml
CuSO4·5H2O
 
0.0005g/200ml
CoCl2·6H2O
 
0.0005g/200ml
KI
 
0.0166g/200ml
Na2MoO4·2H2O
 
0.005g/200ml

    MS-C:稱取CaCl2·2H2O 22.0g蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
    MS-D:吸取母液的母液如下,蒸餾水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.
 
母液的母液量
母液終濃度
煙酸
 
0.01g/200ml
VB6
 
0.01g/200ml
VB1
 
0.002g/200ml
甘氨酸
 
0.04g/200ml
 
   MS-E:稱取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸餾水溶解,容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。

4  
MS培養基基本工作液的配制 
     MS培養基基本工作液質量表
組成成分
數量(mg/l)
組成成分
數量(mg/l)
NH4NO3
1650
Na2-EDTA
37.3
KNO3
1900
FeSO4·7H2O
27.8
CaCl2·2H2O
440
CuSO4·5H2O
0.025
MgSO4·7H2O
370
蔗糖
30
KH2PO4
170
肌醇
100.0
KI
0.83
煙酸
0.5
H3BO3
6.2
鹽酸吡哆醇
0.5
MnSO4·4H2O
22.3
甘氨酸
2.0
ZnSO4·7H2O
8.6
鹽酸硫銨等
0.4
Na2MoO4·2H2O
0.25
 
 
CoCl2·6H2O
0.025
pH
5.8

    (1)配制1升工作液,燒杯中放入700ml左右的蒸餾水,按順序分別吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
    (2)加入固體蔗糖30g(根據具體實驗調節濃度),溶解。
    (3) 加入所需的激素。定容至1000ml。
    (4)0.1-1mol/l的HCl或NaOH調整pH值。
    (5)如果配制固體培養基加入一定濃度的瓊脂。瓊脂濃度為10%~15%。
    (6) 液體培養基可選擇高溫高壓滅菌和過濾消毒2種方法。固體培養基采用高溫高壓滅菌方法。倒入三角瓶等培養器皿中,封口消毒。
    (7)工作液配制的注意事項:
           由于培養基內有豐富的營養物質,極利細菌和真菌繁殖,造成污染,影響組培的成功,一般有高溫高壓消毒和過濾消毒兩種方法。
           高溫高壓消毒: 一般用消毒鍋消毒,注意消毒鍋不能裝的過滿,鍋內保持1.1Kg/cm2的壓力,溫度120℃左右,大約15-20分鐘即可。
           過濾消毒: 一些易受高溫破壞的培養基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高溫高壓法消毒,可用過濾消毒,可過濾消毒后再加入已高溫高壓消毒的培養基中,過濾消毒應在無菌室或超凈工件臺上進行,以避免污染培養基。

原創作者:南京森貝伽生物科技有限公司

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